پاورپوینت رنگ آمیزی کپسول (pptx) 11 اسلاید
دسته بندی : پاورپوینت
نوع فایل : PowerPoint (.pptx) ( قابل ویرایش و آماده پرینت )
تعداد اسلاید: 11 اسلاید
قسمتی از متن PowerPoint (.pptx) :
بنام خدا
رنگ آمیزی کپسول
در سطح خارجی بعضی از باکتریها لایه لعابی شکلی بنام کپسول وجود دارد که اکثرا از جنس پلی ساکاریدی ( کلبسیلا پنومونیه ) میباشد.
بطور استثنا کپسولهایی از جنس پروتئین ( باسیلوس آنتراسیس ) یا لیپید ( بروسلا ) نیز وجود دارد.
کپسول نقش حفاظتی برای باکتری داشته و بعنوان یک عامل ضد فاگوسیتوز عمل میکند برای همین قدرت بیماریزایی باکتریهای کپسولدار را به کپسول آنها نسبت میدهند.
ضخامت کپسول در باکتریهای مختلف متفاوت است و معمولا به محیط رشد باکتریها بستگی دارد.
از بین محیط های کشت محیط tryptos phosphate agar و محیط skim milk کپسول بزرگتری نسبت به سایر محیط ها تشکیل میشود.
از آنجاییکه کپسولها اکثرا پلی ساکاریدی و محلول در آب و غیر یونی هستند با روشهای معمول رنگ آمیزی قابل مشاهده نمیباشند. چون بیشتر تکنیک های رنگ آمیزی براساس تشکیل پیوندهای شیمیایی یونی بین اجزا یونی مولکول رنگ و مناطق یونی سطح سلول باکتری است.
بنابراین به علت غیر یونی بودن کپسول پیوندهای فوق تشکیل نشده و کپسول با روشهای معمولی رنگ نخواهد شد.
روشهای رنگ آمیزی کپسول
1- رنگ آمیزی منفی( negative stain )
در این روش از مرکب چین یا نیگروزین استفاده میکنند
به این ترتیب که به سوسپانسیون میکروبی روی لام یک قطره مرکب چین اضافه نموده و روی آن لامل قرار داده و با عدسی 40 مشاهده میکنند.
در این روش کپسول به صورت هاله ای روشن در زمینه ای سیاه رنگ مشاهده میشود.
رنگ آمیزی مثبت
به کمک این روش ها کپسول به صورت رنگ شده قابل مشاهده خواهد بود
روش آنتونی
روش هیس (Hiss method)
روش ائوزین (Eosin method)
روش مویر (Muier method)
رنگ اولیه
محلول آبکی 1٪ کریستال ویوله : تمامی گسترش حاوی اشکال رویشی باکتریها و ترکیبات کپسولی بنفش رنگ میشود.
عامل بیرنگ کننده و رنگ مخالف:
سولفات مس 20٪ :
کپسول باکتری برخلاف دیواره سلولی ماهیت یونی ندارد،
به همین دلیل پس از کاربرد رنگ اولیه، کریستال ویوله به کپسول متصل نمیشود بلکه فقط به آن میچسبد.
همچنین از آنجاییکه کپسول ماده ای محلول در آب است به منظور شستشوی گسترش رنگ شده بجای آب از محلول سولفات مس استفاده میکنند.
سولفات مس بعنوان یک رنگ مخالف به ترکیبات کپسولی بیرنگ شده متصل میگردد.
بنابراین پس از اتمام رنگ آمیزی سلول باکتری به رنگ بنفش پررنگ و کپسول آن به رنگ آبی کمرنگ دیده میشود.
رنگ آمیزی کپسول به روش آنتونی
روش کار
یک لوپ کامل از محیط کشت را برداشته و بر روی لام قرار می دهیم و اجازه می دهیم که در دمای اتاق کاملاً خشک شود.
لام را بر روی راک رنگ آمیزی قرار داده و به مدت یک دقیقه با کریستال ویوله ۱% رنگ آمیزی کرده،
سپس بعد از رنگ آمیزی با سولفات مس ۲۰% لام را شستشو می دهیم. در مرحله بعد با پنبه لام را خشک می کنیم.
در این مرحله با افزودن روغن ایمرسیون، نمونه را در زیر میکروسکوپ مشاهده می کنیم. کپسول یک هاله بی رنگ را در اطراف سلول تیره (بنفش) باکتری تشکیل داده است.
رنگ آمیزی اسپور
اندوسپورهای باکتریایی ، ساختارهای کروی و یا بیضی شکل کوچکی هستند که نسبت به دمای بالا ، تشعشع و وجود مواد شیمیایی از قبیل ضد عفونی کننده ها بسیار مقاوم هستند . به شکل درون سلولی توسط برخی از باسیلها تولید می شوند به همین دلیل به آنها اندوسپور می گویند. اندوسپورها از سلولهای مولد کوچکترند و مشخصات متقاوتی دارند که قابل توجه تر از همه مقاومت زیاد آنها نسبت به شرایط نامساعد است .
اسپور بخشی ازچرخه زندگی بعضی از جنسها باکتریها می باشد و در واقع اسپور یک مرحله خفته یا غیر فعال از زندگی باکتری است ..
وجود اسپور در کشت باکتریها برای تشخیص و تفکیک آنها اهمیت دارد ، زیرا تشکیل اسپور اساسا محدود با باکتریهای گرم مثبت میله ای شکل در دو جنس باسیلوسها و کلستریدیومها است .
اندازه و محل قرار گرفتن اسپور در داخل باکتری نیز برای تشخیص ارگانیسمها اهمیت دارد مثلا اسپور می توانند در مرکز ، نزدیک به انتها و یا در انتهای یاخته قرار بگیرد. قطر اسپور می تواند بزرگتر و یا کوچکتر از خود باکتری باشد . اگر اسپور قطر بیشتری نسبت به یاخته رویشی داشته باشد موجب تورم یا بزرگی و تغییر شکل باکتری می شود.
به دوطریق می توان اسپور را زیر میکروسکوپ مشاهده نمود
چون اسپور پوشش مقاومی است که در برابر نفوذ رنگ مقاومت می کند بنابراین در رنگ آمیزی معمولی می توان اسپور را به صورت ناحیه رنگ نشده در داخل سلول رویشی (باکتری مولد) مشاهده نمود.
اگر تعداد اسپورهای موجود کم باشد و یا اگر از داخل باکتری مولد خارج شده و در گستره به صورت پراکنده باشند اغلب توسط رنگ آمیزی ساده و یا گرم قابل مشاهده نخواهند بود.